抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒的使用注意事项

抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒的使用需严格遵循以下注意事项，以确保检测结果的准确性和操作安全性：

一、操作前准备

仅供体外诊断使用

试剂盒仅限实验室体外定量检测血浆样本中的抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性，禁止用于其他用途。

仔细阅读说明书

操作前需完整阅读试剂盒说明书，熟悉实验流程、试剂组成及储存条件，避免因操作不当导致结果偏差。

试剂与设备准备

试剂平衡：从冷藏环境（2℃～8℃）取出的试剂需在室温（18℃～25℃）平衡15～30分钟，避免温度骤变影响试剂性能。

设备校准：确保酶标仪、洗板机等设备已校准，加样器需定期维护，避免交叉污染。

自备物品：根据试剂盒要求准备高精度加样器、枪头、蒸馏水等辅助工具。

二、实验环境要求

避免恶劣环境

实验需在清洁、无腐蚀性蒸汽（如次氯酸钠、酸碱、乙醚）及灰尘的环境中进行，防止试剂或样本受污染。

温湿度控制

实验环境温度建议保持在18℃～25℃，湿度控制在30%～70%，避免极端条件影响反应稳定性。

三、样本处理规范

样本采集与保存

血清样本：使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，采集后3000转离心10分钟，分离血清与红细胞。

血浆样本：采用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。

其他样本：细胞上清液需3000转离心10分钟去除颗粒；组织匀浆需加入生理盐水捣碎后离心取上清。

保存条件：样本若不立即检测，需分装后冻存于-20℃，避免反复冻融，解冻时需在室温下均匀充分解冻。

样本稀释与加样

稀释操作：待测样本需用样品稀释液按比例稀释（如5倍稀释），加样时将样品加于酶标板孔底部，避免触及孔壁，轻轻晃动混匀。

高浓度样本处理：若样本OD值超过标准品最高浓度孔，需先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后重新测定，最终结果乘以总稀释倍数（×n×5）。

四、试剂使用规范

试剂有效期与储存

有效期：试剂需在有效期内使用，未开封试剂盒保存于2℃～8℃，有效期通常为6～24个月（具体以说明书为准）。

开封后保存：剩余试剂需及时密封，放回2℃～8℃条件贮存，避免受潮或污染。

试剂复溶与稀释

标准品复溶：冻干标准品需按说明书加入标准品稀释液，室温静置10分钟并反复颠倒助溶，再按比例稀释至所需浓度。

洗涤液稀释：浓洗涤液可能析出结晶，稀释时可在水浴中加温助溶，按比例（如30倍）用蒸馏水稀释后备用。

底物避光保存：底物溶液需避光保存，使用前用灭菌移液器吸取所需体积，剩余底物丢弃，不可倒回原瓶。

五、实验操作要点

包被条处理

打开包被条后，剩余部分需放入封袋中密封，防止受潮影响实验结果。

加样与混匀

微量移液器吸嘴：不可混用，避免交叉污染。

孔内样品混合：需震荡混合均匀，确保无气泡存在，否则可能影响吸光度检测。

洗涤步骤

彻底洗涤：洗液需注满每孔，但不可用水过猛，避免产生气泡。每次洗涤后甩干孔内液体，最后拍干孔内残留液体。

洗板机使用：推荐使用洗板机，若手动洗涤需重复5次以上，确保洗涤彻底。

反应条件控制

温育时间与温度：严格按说明书控制每步反应时间（如37℃温育30分钟）和温度，操作需紧凑，避免温度波动影响结果。

避光反应：加入发光底物后需室温避光反应，强光可能影响测定结果。

六、安全与废弃物处理

个人防护

处理试剂和样本时需戴一次性手套，操作后彻底洗手，避免直接接触皮肤或黏膜。

废弃物处理

所有样本及使用后的试剂盒应视为潜在传染性物质，废弃时需按当地政府和国家有关规定进行无害化处理，如高压灭菌或交由专业机构处理。

七、特殊情况处理

浓洗涤液结晶

若浓洗涤液出现结晶，可在水浴中加温助溶，稀释后不影响实验结果。

酶标板孔内水样物质

刚开启的酶标板孔中可能有少许水样物质，此为正常现象，不会影响实验结果。

结果异常处理

若实验结果异常（如OD值超出标准曲线范围），需检查样本稀释倍数、试剂有效期及操作步骤，必要时重新实验。