缺血修饰白蛋白测定试剂盒的使用注意事项

缺血修饰白蛋白测定试剂盒时，需注意以下关键事项，以确保检测结果的准确性和实验安全性：

一、样本采集与处理

避免溶血

溶血样本会释放血红蛋白，干扰IMA检测，导致结果偏高。若样本出现溶血，应重新采集。

样本类型与保存

血清/血浆：采集后需尽快分离（如1000×g离心10-20分钟），避免反复冻融。若需保存，建议分装后于-20℃或-80℃冷冻。

其他样本：如细胞培养上清、组织匀浆等，需按说明书要求离心处理，去除颗粒和聚合物。

样本稀释

若样本中IMA浓度超出标准曲线范围，需用样本稀释液进行适当稀释后重新检测。

二、试剂准备与储存

试剂复温

所有试剂使用前需恢复至室温（20-25℃），避免温度差异影响反应效率。

标准品稀释

标准品需按说明书要求现用现配，不可储存稀释后的标准品。

稀释过程中需充分混匀，避免局部浓度不均。

洗涤液配制

浓缩洗涤液需按比例稀释（如1:20或1:50），稀释后若有结晶析出，可水浴加热助溶。

洗涤液需充分混匀后使用，避免残留沉淀堵塞洗板机管道。

试剂保存

未开封试剂盒需按标签说明保存（如2-8℃或-20℃）。

开封后剩余试剂需密封保存，避免污染和挥发。

三、实验操作规范

加样顺序与时间

严格按说明书规定的顺序加入样本、标准品、抗体和底物，确保所有反应孔温育时间一致。

加样时避免产生气泡，使用一次性吸头防止交叉污染。

温育条件

温育温度（如37℃）和时间需严格控制，避免温度波动影响反应结果。

温育过程中需覆盖酶标板，防止液体蒸发导致浓度变化。

洗涤步骤

洗涤次数和浸泡时间需按说明书要求执行（如手工洗涤需重复3-5次，每次浸泡30秒）。

洗板后需彻底拍干酶标板，避免残留液体干扰显色反应。

显色与终止

显色剂（如TMB）需避光保存，现用现配。

加入终止液后需立即测定OD值，避免颜色衰减导致结果偏差。

四、仪器与设备要求

酶标仪校准

使用前需预热酶标仪，并校准至450nm波长，确保读数准确。

避免在强光直射下操作酶标仪，防止信号干扰。

洗板机设置

若使用自动洗板机，需提前设置洗涤程序（如洗涤次数、浸泡时间），并验证洗涤效果。

五、安全与防护

个人防护

实验过程中需佩戴手套、口罩和护目镜，避免直接接触试剂和样本。

禁止在实验室内进食、饮水或吸烟，防止有毒物质摄入。

废弃物处理

所有使用过的试剂、样本和吸头需按生物危害废弃物处理，避免污染环境。

含NaN₃的试剂需单独处理，因其可能抑制酶活性并产生有害气体。

六、结果解读与质量控制

标准曲线绘制

使用标准品的OD值绘制标准曲线，确保相关系数（R²）≥0.990，以保证线性回归的准确性。

若标准曲线异常（如非线性），需检查实验操作或试剂质量。

复孔检测

每个样本和标准品建议设置复孔，以减少偶然误差，提高结果可靠性。

批间差异控制

不同批号的试剂盒不得混用，避免因试剂差异导致结果偏差。

定期验证试剂盒的批间变异系数（CV），确保其符合说明书要求（如CV≤15%）。