缺血修饰白蛋白测定试剂盒的使用方法

（IMA）缺血修饰白蛋白测定试剂盒的使用方法如下：

试剂盒原理与组成

IMA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），通过包被IMA捕获抗体的微孔板，依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体，经温育、洗涤后，加入底物TMB显色。显色反应在过氧化物酶催化下由蓝色转为黄色，颜色深浅与样品中IMA浓度成正比。最终用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。试剂盒通常包含酶标板、标准品、样品稀释液、HRP标记抗体、底物溶液、终止液及洗涤缓冲液等组件。

标本采集与保存

血清：全血标本室温静置2小时或4℃过夜后，1000g离心20分钟取上清；或保存于-20℃/-80℃，避免反复冻融。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃、1000g离心20分钟取上清；或低温保存，避免反复冻融。

其他标本：细胞培养上清、组织匀浆等需1000g离心20分钟取上清，低温保存并避免反复冻融。溶血标本不宜检测。

试剂准备

试剂平衡：所有试剂使用前需恢复至室温（20-25℃），避免直接加热溶解。

标准品稀释：按说明书用标准品稀释液梯度稀释标准品（如120、60、30、15、7.5、0 U/mL），每次实验使用新鲜稀释液。

洗涤缓冲液稀释：按1:20比例用蒸馏水稀释浓缩洗涤液（如1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水）。

操作步骤

加样：每孔加入50μL标准品或待测样本（若样本浓度过高需预先稀释），空白孔不加。

温育：封板后37℃温育60分钟，使抗原抗体充分结合。

洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液静置1分钟后甩干，重复洗涤5次并拍干。

加酶标抗体：每孔加入100μL HRP标记的检测抗体（空白孔除外），封板后37℃温育30分钟。

再次洗涤：同前步骤重复洗涤5次。

显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

终止反应：每孔加入50μL终止液，蓝色立即转为黄色。

测定OD值：15分钟内用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度。

结果计算

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标，用坐标纸或软件绘制曲线并拟合直线回归方程。

计算样本浓度：将样本OD值代入方程得出浓度，若样本稀释则需乘以稀释倍数。

注意事项

避免污染：试剂和样本加样时需使用干净吸头，防止交叉污染；封板膜仅限一次性使用。

操作规范：温育时确保微孔不干燥，洗涤彻底以减少背景干扰；底物液需避光保存且变蓝后不可使用。

安全防护：实验中避免直接接触终止液和底物液，若接触需立即用水冲洗；禁止用嘴吸取试剂。

储存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，开封后剩余酶标板需密封并加干燥剂，保存于-20℃；试剂盒有效期通常为6个月。