酸性糖蛋白测定试剂盒的使用注意事项

使用酸性糖蛋白测定试剂盒（如α1酸性糖蛋白）时，需重点关注以下注意事项，以确保实验结果的准确性和操作安全性：

一、实验前准备

试剂平衡与保存

试剂盒从冷藏环境（2-8℃）取出后，需在室温下平衡15-30分钟，避免温度骤变影响试剂性能。

酶标包被板开封后，未用完的板条应立即装入密封袋，加干燥剂保存，防止受潮。

不同批号的试剂不得混用，保质期内使用，过期试剂可能失效。

样品处理

血清/血浆：使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激。收集后1000-3000转离心10-20分钟，分离上清液。若出现沉淀，需再次离心。

细胞上清液：离心去除颗粒和聚合物（1000×g，10分钟）。

组织匀浆：加入适量生理盐水捣碎后离心（1000-3000×g，10-20分钟），取上清液。

保存：若样品不立即使用，应分装后冻存于-70℃，避免反复冻融。解冻时需在室温下均匀解冻，禁止37℃以上加热。

标准品稀释

标准品需按说明书进行梯度稀释（如400μg/mL→200μg/mL→100μg/mL等），稀释后的标准品应丢弃，不可保存。

若样本浓度超出试剂盒检测范围（如10-320μg/mL），需用特殊稀释液稀释后重新测定，结果乘以总稀释倍数。

二、实验操作规范

加样与温育

所有加样操作需使用加样器，并定期校准，避免误差。加样时间最好控制在5分钟内，标本量大时推荐使用排枪。

样本需加至酶标板孔底部，避免触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育时需用封板膜封板，防止水分蒸发，温育条件（如37℃）需严格按说明书执行。

洗涤与显色

洗涤时需充分拍干孔内液体，避免吸水纸直接接触孔底，防止交叉污染。

显色剂（如TMB）需避光保存，显色时间（如37℃避光15分钟）需严格控制，避免颜色过深或过浅。

终止液（如硫酸）对光敏感，加入后需立即测定OD值。

结果判定

实验结果必须以酶标仪在450nm波长下的读数为准，空白孔调零后测定各孔OD值。

根据标准曲线计算样本浓度时，需乘以稀释倍数（如样本已稀释5倍，结果需×5）。

三、安全与防护

个人防护

实验过程中需穿实验服，戴乳胶手套，避免直接接触试剂和样本。

禁止在实验室内吃喝、抽烟或使用化妆品，防止污染。

废弃物处理

所有样品、洗涤液和废弃物需按传染物处理，避免环境污染。

终止液和底物A、B液具有腐蚀性，接触后需立即用水冲洗。

四、常见问题与解决

显色过浅

可能原因：温育时间不足、显色剂失效或样本浓度过低。

解决方案：延长显色时间、更换显色剂或重新稀释样本。

OD值异常

可能原因：封板膜未密封导致温育时水分蒸发，或洗涤不彻底导致交叉污染。

解决方案：确保封板膜密封良好，洗涤时充分拍干孔内液体。

样本溶血或高血脂

可能原因：采集样本时操作不当或样本保存不当。

解决方案：重新采集样本，避免溶血或高血脂血，检测前离心或过滤。