甘胆酸测定测定原理:甘胆酸(GCA)是胆汁中的主要胆盐成分,在肝脏和胆囊中合成,由胆汁排入肠道,经小肠上皮细胞摄取后经门静脉进入肝脏。正常情况下,门静脉系统中的 GCA被肝细胞摄取并在肝细胞内合成胆固醇酯,经门静脉系统进入肝脏的血液中。胆汁酸在胆汁中含量很低,血浆中浓度也很低,因此利用测定血浆中胆酸含量来间接反映胆道梗阻程度。
检测方法:用内标法定量测定。取血浆25 mL,加入内标物9 mL (1 mmol/L),用0.45μm微孔滤膜滤过,加入1.0 mL重铬酸钾溶液,振摇30 min,滤过后取上清液1 mL经0.45μm微孔滤膜滤过,作为空白对照液。取10 mL注入液相色谱仪,按外标法定量检测血浆中的甘胆酸。
样品前处理:取标本在4℃冰箱中保存。标本采集后立即迅速置于室温下4℃冰箱中保存(以甘胆酸为标准品)。
样品测定:取标本30 mL加内标物9 mL于50 mL容量瓶中,用0.45μm微孔滤膜滤过后取上清液1 mL加入10 mL重铬酸钾溶液和0.1 mol/L的 NaOH溶液混合液(1 mol/L)振摇30 min,再加入1.0 mL重铬酸钾溶液和0.1 mol/L的 NaOH溶液混合液(1 mol/L)振摇30 min后取上清液1 mL加入10 mL重铬酸钾溶液和1.0 mL NaOH溶液混合液(1 mol/L)振摇30 min,再加入1.0 mL重铬酸钾溶液和0.1 mol/L的 NaOH溶液混合液(1 mol/L)振摇30 min后取上清液1 ml入小量瓶中。