B因子测定试剂盒的工作原理

B因子测定试剂盒主要基于酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，通过抗原-抗体特异性结合反应来检测样本中B因子的含量，其核心工作原理及流程如下：

一、核心原理

抗原-抗体特异性结合

B因子（补体因子B）作为抗原，与试剂盒中预先包被在固相载体（如微孔板）上的特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

酶标记技术放大信号

加入酶标记的二抗（如辣根过氧化物酶，HRP），与已结合的B因子形成“固相抗体-B因子-酶标二抗”复合物。酶标记物可催化底物显色，通过颜色深浅定量分析B因子浓度。

显色反应与定量分析

加入底物（如TMB），酶催化底物生成有色产物（如蓝色），在酸性条件下转为黄色。颜色深浅与B因子浓度成正比，通过酶标仪测定吸光度（OD值），绘制标准曲线计算样本中B因子含量。

二、操作流程（以双抗体夹心法为例）

样本准备

血清/血浆：离心分离上清液，避免反复冻融。

组织匀浆：用预冷PBS冲洗组织，剪碎后匀浆，离心取上清。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，取上清检测。

加样与温育

包被板中加入标准品（梯度稀释）和待测样本，温育使抗原与固相抗体结合。

洗涤去除未结合成分，减少非特异性干扰。

加入酶标二抗

加入HRP标记的二抗，温育形成复合物。

再次洗涤，去除未结合的酶标抗体。

显色与终止

加入底物A、B，避光温育显色。

加入终止液（如硫酸），颜色由蓝转黄。

结果测定

酶标仪450nm波长下测定OD值。

根据标准曲线计算样本中B因子浓度。

三、关键技术特点

高灵敏度

酶催化放大信号，可检测低至ng/mL级别的B因子，适用于早期疾病诊断或微量样本分析。

高特异性

抗原-抗体特异性结合，避免交叉反应，确保结果准确性。

操作简便

标准化流程，配套试剂盒包含所有必要组分，适合临床或科研快速检测。

定量分析

通过标准曲线实现绝对定量，为疾病诊断提供客观数据支持。

四、应用场景

补体系统功能评估：检测B因子水平反映旁路途径活性，辅助诊断遗传性血管性水肿（HAE）、阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）等疾病。

自身免疫病监测：如系统性红斑狼疮（SLE）患者B因子过度激活可能加剧炎症，检测其水平有助于评估疾病活动度。

药物研发：验证补体系统抑制剂（如Eculizumab）的疗效，监测治疗前后B因子变化。