同型半胱氨酸测定试剂盒的使用需重点关注以下注意事项,以确保检测结果的准确性和操作安全性:
一、样本采集与处理
空腹采血
需采集空腹血样本,避免饮食影响同型半胱氨酸水平。采集后应立即冷藏(2-8℃),并在4小时内完成测定;若需延迟检测,需冷藏血清并密封保存(2-8℃下可存48小时)。
避免溶血与反复冻融
溶血样本会干扰检测结果,需避免使用。若样本需长期保存,应分装后于-20℃或-70℃冷冻,并避免反复冻融,以防蛋白质变性。
高浓度样本稀释
若样本中同型半胱氨酸含量超过50μmol/L,需用生理盐水或8.5%盐水稀释后测定,结果乘以稀释倍数。
二、试剂储存与使用
储存条件
试剂盒需在2-8℃避光保存,有效期一般为1-2年(具体以说明书为准)。
开口后的试剂在仪器仓中(2-8℃)可稳定30天,但需避免污染。
试剂配制与使用
试剂1和试剂2需按说明书要求比例混合,且不同批号试剂不可混用。
酶标记抗体、生物素标记抗体等工作液需临用前配制,避免活性丧失。
避免交叉污染
使用一次性吸头,避免加样器金属部分接触试剂;未用完的板条或试剂需密封保存。
三、操作规范
仪器校准与质控
检测前需对仪器(如全自动生化分析仪、酶标仪)进行校准,确保波长(如340nm、450nm)、光径(如1.0cm)等参数准确。
每批次检测需进行质量控制,使用标准品绘制标准曲线,确保结果在参考值范围内。
加样与反应条件
严格按说明书控制加样量(如试剂1 185μL、试剂2 50μL、样本10μL)和反应时间(如37℃孵育5分钟)。
酶循环法需设置测定温度为37℃,波长340nm,测定模式为速率法,时间120秒。
洗板与显色
ELISA法需充分洗涤酶标板(4-6次),避免未结合试剂干扰。
显色液需避光孵育(如30分钟),加入终止液后15分钟内完成检测。
四、安全与废弃物处理
个人防护
试剂若不慎溅到皮肤或眼睛,需立即用清水冲洗;误食需就医。
试剂二含叠氮化钠,操作时需戴橡胶手套。
废弃物处理
所有样本、洗涤液和废弃物需按传染物处理,遵守相关法律法规。
避免直接排放含化学试剂的液体,防止环境污染。
五、结果解读与验证
综合分析
检测结果需结合患者病史、症状和其他检查结果(如叶酸、维生素B12水平)综合判断,避免单一指标诊断。
异常结果复核
若结果超出参考值范围,需重新测定确认,并检查样本处理、试剂配制等环节是否存在误差。